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关紧取样室内外门，并抽真空校验
2. 接上气路并检查气路，为防止漏气，必要时可在各接管处用密封胶粘合; 使用 (一)操作室厌氧环境形成：按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室内放入二个无毒塑料袋; 通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度及安全温度;
3. 开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间按具体实验.
4. 厌氧培养箱应安放在温差较小、操作方便的位置，应避免阳光直晒和远离采暖设备，放置平稳; 2. 将混合气瓶、氮气瓶安放平稳，并分别装好减压阀(含压力表)，安置在适当位置;
5. 操作室内第一次置换(氮气置换)： A. 先用橡皮管插入操作室内进气口，另一头插入塑料袋; B. 接通氮气进气路，打开氮气控制阀，使二只塑料袋充足氮气，关闭阀门 1，然后扎紧袋口; C. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧; D. 把塑料袋内氮气渐渐放于操作室内，至全部放出。
6. 操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后开美兰指示剂,观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境;
7. 操作室第三次置换(混合气体置换)： A.调换气路打开混合气阀进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气; B.混合气充满塑料袋后，关掉混合气阀，并打开阀，使混合气经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右; C. 把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内; D. 通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极微量状态。
8. 操作室第二次置换(氮气置换)重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。